C hepatīts ir aknu infekcija, ko izraisa Flaviviridae HCV vīruss, kas sastāv no vienas vai vairākām RNS molekulām. Parasti tiek veikta virkne diagnostikas pasākumu, lai pacientam noteiktu hepatītu C. PCR ir analīze, kas precīzi apstiprina diagnozi. Bieži vien slēdzienu ārsti sniedz, kad pacientam jau ir pirmās slimības pazīmes.
Kas ir C hepatīts
Aknu bojājumus, ko izraisa vīrusu infekcija, ko pārnēsā ar asinīm vai seksuālu kontaktu, medicīnā sauc par hepatītu C. Izraisītājs ir Flaviviridae dzimtas nešūnu infekcijas izraisītāju RNS saturošs vīruss. Infekcija var palikt organismā ilgu laiku, neizpaužoties. Tāpēc tikai tad, ja mikroorganisms tiek atklāts, izmantojot asins analīzi, izmantojot PCR RNS RNS, C hepatīts (kā diagnoze) tiek uzskatīts par pamatotu.
Flavivīruss netiek ražots mākslīgi audzētās izolētās šūnās. Reprodukcijas procesā infekcijas izraisītājs rada imunoloģiski atšķirīgas modifikācijas. Šie faktori neļauj organismam dotatbilstošu aizsardzības reakciju, un ekspertiem ir grūtības izstrādāt efektīvu vakcīnu.
Vīruss tiek pārnests parenterāli. Lai infekcija notiktu, tai pietiekamā daudzumā jāiekļūst tieši asinsritē.
Kādi testi tiek veikti attiecībā uz C hepatītu
Aknu vīrusu patoloģijas tiek diagnosticētas, izmantojot laboratoriskos izmeklējumus. C hepatīta klīniskie pētījumi tiek veikti, pētot svešus un bīstamus antigēnus vai olb altumvielu savienojumus (antivielas) pacienta biomateriālā, galvenokārt asinīs.
- Enzīmu imūntests (ELISA). Metodes pamatā ir lgM antivielu noteikšana asinīs. Imūnglobulīns tiek uzskatīts par lielāko un ir pentamers. Tas izpaužas kā limfocītu primārā aizsargreakcija pret nezināmu svešu vielu.
- Radioimmunotests (RIA) - lgM imūnglobulīna kvantitatīva noteikšana, izmantojot iezīmētu joda radioaktīvo izotopu.
- C hepatīta PCR - vīrusa RNS noteikšana biomateriālā (asinīs). Šī analīze ticami apstiprina diagnozi.
IgG pārbaude nav uzticama. Tās klātbūtne asins serumā var liecināt ne tikai par flavivīrusa klātbūtni, bet arī par citu pagātnes infekciju, kurai ir tas pats patogēns.
Kas nosaka PCR analīzi
Polimerāzes ķēdes reakcija (PCR) balstās uz DNS apgabalu identificēšanu, kas ir specifiski noteiktiem patogēniem pētnieciskā materiāla paraugos (epitēlija, asiņu). Analīze ļauj identificēt patogēnos mazākos organismus (vīrusus), nosakot to RNS vai DNS bioloģiskajā materiālā.
Laboratorijas procedūra antivielu noteikšanai C hepatīta PCR tiek veikta 3 posmos:
- Atlasīt. Pētītais biomateriāls tiek attīrīts no piemaisījumiem un DNS tiek iegūta hromatogrāfijas kolonnas kustīgajā fāzē.
- Pastiprinājums. Analīze tiek veikta ierīces termostata ciklā. Tas silda un atdzesē mēģenes ar noteiktu cikliskumu. Vienam pētījumam tiek veikti līdz 35 cikliem. Rezultāts ir pietiekams DNS fragmentu skaits, lai atklātu, identificētu un novērtētu patogēnu.
- Elektroforēze. Iegūtos fragmentus ievieto želejā ar dažādu agarozes piesātinājumu un veic elektroforēzi. Iegūtā elektroferogramma tiek analizēta datorā.
Tiek izmantots ne tikai standarta PCR pētījums, bet arī reāllaika PCR analīze. Šī ir reāllaika diagnostika. Metode ļauj veikt kvalitatīvu un kvantitatīvu analīzi, kas ļauj identificēt slimības veidošanos un dinamiku, kā arī noteikt terapiju, kuras mērķis ir novērst patoloģijas rašanās cēloni. Reāllaika PCR izmanto arī, lai noteiktu infekcijas izraisītāju tīrkultūru (genotipēšana).
Kā tiek veikts polimerāzes ķēdes reakcijas tests
Diagnostikai var izmantot jebkuru cilvēka bioloģisko šķidrumu. Biomateriāls C hepatīta testēšanai parasti ir asinis.
Paraugu ņemšana diagnostikai tiek veikta procedūrābirojs. Lai ņemtu asinis, izmantojiet vienreizējās lietošanas mēģenes ar vielu, kas kavē asins recēšanu. Aktivitātes, kas vērstas uz infekcijas izraisītāju izplatības novēršanu, palīdz izvairīties no cita mikroorganismu celma iekļūšanas no ārpuses.
C hepatīta PCR asinis tiek ņemtas no rīta tukšā dūšā. Paraugu nekavējoties nosūta uz laboratoriju. Biomateriālu atļauts uzglabāt temperatūrā no +4 līdz +8 grādiem pēc Celsija. Konteineri ir marķēti un nodrošināti ar norādījumiem. Testa rezultāti ir pieejami 48 stundu laikā, dažreiz ātrāk.
PCR veidi
Polimerāzes ķēdes reakcijas pielietojuma diapazons ir diezgan plašs. Infekcionisti ar PCR nosaka B hepatītu, asinssūcēju kukaiņu pārnēsātās slimības, AIDS, tuberkulozi. Onkoloģijā, izmantojot šo metodi, audzēja šūnas tiek atklātas agrīnā stadijā.
Ir aptuveni četrpadsmit analīzes veidi. Viena vai otra veida izmantošana ir atkarīga no analīžu apjoma un gala rezultātiem. Daži PCR veidi ir nepieciešami, ja rezultāts ir nepieciešams 20 minūšu laikā.
C hepatīta diagnosticēšanai izmanto 3 veidu polimerāzes ķēdes reakciju:
- Kvalitatīvais novērtējums var būt vai nu pozitīvs, kas norāda uz infekcijas klātbūtni organismā, vai negatīvs, kas norāda uz flavivīrusa neesamību.
- Reālā laika PCR (kvantitatīvā analīze) - nosaka patogēna kvantitatīvo RNS SV/ml.
- Genotipa noteikšana ir analīze, kas atklāj vīrusa veidu (genotipu).
Lai precīzi identificētu un noteiktu slimību, kam sekovisi trīs pētījumu veidi tiek izmantoti, lai nozīmētu optimālu terapiju.
Kvalitatīva polimerāzes ķēdes reakcijas analīze
Analīze ir obligāta ikvienam, kam ir ELISA tests, kurā konstatētas antivielas pret HCV. Kvalitatīvais C hepatīta PCR ir standarta jutības tests. Metode ir vērsta tikai uz noteikšanu, netiek veikta citu vielu skaitīšana vai izdalīšana.
Lai noteiktu antivielas, tiek izmantotas īpašas testēšanas sistēmas, kuru jutības slieksnis ir vismaz 50 SV/ml. Ja tiek konstatētas antivielas, tiek noteikti citi precizējoši testi. Ja rezultāts ir negatīvs, turpmāka pārbaude netiks veikta.
Dažos gadījumos kļūdaini negatīvu rezultātu var izraisīt nekompetents laboratorijas personāls vai sliktas kvalitātes reaģenti. Apdrošināšanai labāk ir atkārtoti veikt analīzi citur.
Kvantitatīvā PCR
Šo metodi izmanto, lai tieši pētītu flavivīrusu skaitu vienā reakcijas ciklā. Precīzai mērīšanai tiek izmantoti hibridizācijai izmantotie DNS fragmenti vai fluorescējoši marķēti praimeri. Ir ekonomiska noteikšanas iespēja, izmantojot SYBL Green krāsvielu. Krāsviela ir iesprūdusi nelielā DNS rieviņā un, apstarojot ar lāzeru, kļūst zila.
Koncentrāciju nosaka aparāts-pastiprinātājs digitālā ekvivalentā. Vērtības dažādās laboratorijās var nedaudz atšķirties, tāpēc tās ir jāsalīdzina ar atsauces vērtībām.
Kvantitatīvā PCRC hepatīts palīdz izvēlēties optimālo zāļu devu un noteikt terapijas ilgumu. Pētījuma biežums ir atkarīgs no slimības stadijas, genotipa veida un noteiktā ārstēšanas kursa.
Genotipa noteikšana
C hepatīta vīrusam ir mainīgs ģenētiskais sastāvs. Daudzas modifikācijas padara neiespējamu vakcīnas izveidi, kā arī sarežģī terapiju. Kopumā ir identificēti un reģistrēti 11 genotipi un 100 apakštipi. Bijušās PSRS valstīs ar C hepatītu inficētām personām PCR galvenokārt nosaka 1.b un 3. genotipus.
Jebkura genotipa klātbūtnē var izklaidēties ciroze vai aknu vēzis. Tāpēc ir tik svarīgi laikus atklāt vīrusu.
Dažiem pacientiem noteiktas zāles, kas paredzētas cīņai pret HCV, ir toksiskas. Genotipēšana ļauj noteikt proteīna veidu un izrakstīt efektīvas zāles.
Tipošanas pārbaužu rezultātos ir cipars ar mazo latīņu burtu, kas norāda vīrusa genotipu. Ja HCV tiek atklāts, bet nav tipizēts, tas nozīmē, ka personai ir genotips, kas nav raksturīgs noteiktam ģeogrāfiskajam apgabalam.
Analīzes rezultāti
Ārsts nodarbojas ar rezultātu atšifrēšanu. Tikai dati no vairākiem pētījumiem (kopā ar anamnēzi un izmeklēšanu) var sniegt vispārēju reālu priekšstatu par slimības vēsturi.
- Veselam cilvēkam kvalitatīvas reakcijas tests biomateriālā neko nekonstatē. Ja ir norādīta vērtība "konstatēts", infekcija tiek apstiprināta, un pacientsnepieciešama turpmāka diagnostika, kam seko ārstēšana.
- Infekcijas izraisītāju skaita noteikšana ļauj novērtēt vīrusu slodzi uz organismu. Parasti C hepatīta kvantitatīvā PCR neatklāj patogēnu. Rādītājs līdz 810^5 tiek uzskatīts par zemu slodzi un ar atbilstošu terapiju garantē labvēlīgu iznākumu. Augstākām vērtībām nepieciešama padziļināta pārbaude un ilgstošas terapijas noteikšana, par kuras pozitīvu iznākumu neviens nevar galvot.
- Pozitīvi genotipēšanas rezultāti norāda, kurš genotips ir atpazīts. Negatīvs rezultāts norāda vai nu uz flavivīrusa neesamību, vai arī uz genotipu, kas nav tipisks šim reģionam.
Ko liecina pozitīvs PCR tests
Jebkurai nopietnai slimībai nepieciešama visaptveroša diagnoze. Pozitīvs C hepatīta PCR apstiprina diagnozi, taču prognozes var izdarīt tikai pēc papildu laboratoriskiem un instrumentāliem pētījumiem.
Vīrusa noteikšana nesniedz pilnīgu priekšstatu par patoloģiju. Ir nepieciešams noteikt tā veidu un raksturu, noteikt, kā tas ietekmē aknas un citus orgānus. Agrīnai HCV atklāšanai bieži ir labvēlīgs terapeitiskais rezultāts.
Negatīvs PCR ar pozitīvu ELISA
Novērojot aknu bojājumam raksturīgos simptomus, pastāv liela varbūtība, ka infekcija jau ir nonākusi organismā. Tādēļ jums jāsazinās ar hepatologu vai infekcijas slimību speciālistu. Interviju laikā speciālists apkopos anamnēzi un izrakstīs nepieciešamo izmeklējumu.
JaC hepatīta PCR pētījumu rezultāti ir negatīvi, un enzīmu imūntests ir pozitīvs, tas liecina par antivielu klātbūtni pret flavivīrusu asinīs. Tas parasti notiek, kad infekcija organismā nonāk nelielā daudzumā, tāpēc imūnsistēma pati ar to tika galā. Bet šādi cilvēki joprojām tiek uzskatīti par inficētiem un viņiem ir jāpārbauda ik pēc 6 mēnešiem. Ja ar šādiem testu rezultātiem personai tiek liegta bezmaksas medicīniskā pārbaude, labāk par maksu veikt PCR, lai saglabātu veselību, un, ja rezultāti ir pozitīvi, sazinieties ar speciālistu, lai veiktu diagnostiku un ārstēšanu.
Metodes priekšrocības un trūkumi
Nosakot C hepatīta diagnozi, PCR ir vairākas priekšrocības:
- Agrīna patogēna noteikšana.
- Precīza vīrusa definīcija.
- Diagnostikas efektivitāte.
- Minimālais kļūdu līmenis.
- Augsta jutība.
Metodes trūkumi:
- Augstas analīzes izmaksas. Pārbaudei nepieciešamas dārgas iekārtas, reaģenti un augsti kvalificēts medicīnas personāls. Tas viss kopā veido ievērojamu summu.
- Stingras prasības biomateriāla transportēšanai.
Aknu iekaisuma ārstēšana
PCR analīze C hepatīta vīrusa noteikšanai tiek uzskatīta par būtisku diagnozes noteikšanai, taču ne par galīgu. Lai terapija būtu efektīva, ir nepieciešami vairāki papildu laboratoriskie un instrumentālie pētījumi. Pēc visu nokārtošanasdiagnostikas pasākumi, ko ārsts nosaka ārstēšanu:
- Diēta 5 ir noteikta.
- Alkohols ir pilnībā izslēgts.
- Interferona un ribavirīna kopīga uzņemšana 25 dienas.
- Hepaprotektoru kursi "Essentiale", "Karsil", "Phosphogliv".
- Īpašos gadījumos izmanto diskrētu plazmasferēzi.
Hepatologa izrakstītās zāles lieto regulāri, nemainot devu. Zāļu lietošanas ilgumu nosaka ārsts pēc kontrolpārbaudēm. Pēc terapijas kursa pabeigšanas ik pēc sešiem mēnešiem jāapmeklē ārsts.
PCR-diagnostika ļauj agrīnā stadijā identificēt C hepatīta izraisītāju. Tas veicina terapijas efektivitāti un novērš slimības pāreju tādās bīstamās formās kā ciroze un hepatocelulāra karcinoma.
