Gandrīz visu infekcijas slimību laboratoriskā diagnostika balstās uz antivielu noteikšanu pacienta asinīs, kas tiek ražotas pret patogēna antigēniem, izmantojot seroloģisko reakciju metodes. Viņi sāka izmantot medicīnas praksi no deviņpadsmitā gadsimta beigām līdz divdesmitā gadsimta sākumam.
Zinātnes attīstība ir palīdzējusi noteikt mikrobu antigēno struktūru un to toksīnu ķīmiskās formulas. Tas ļāva izveidot ne tikai terapeitiskos, bet arī diagnostiskos serumus. Tos iegūst, ievadot laboratorijas dzīvniekiem novājinātus patogēnus. Pēc vairāku dienu iedarbības trušu vai peļu asinis izmanto, lai sagatavotu preparātus, ko izmanto, lai identificētu mikrobus vai to toksīnus, izmantojot seroloģiskos testus.
Šādas reakcijas ārējā izpausme ir atkarīga no tās iestatīšanas apstākļiem un antigēnu stāvokļa pacienta asinīs. Ja mikrobu daļiņas ir nešķīstošas, tās izgulsnējas, lizē, saistās vai imobilizējas serumā. Ja antigēni ir šķīstoši, tad parādās neitralizācijas vai izgulsnēšanās parādība.
Aglutinācijas reakcija (RA)
Seroloģiskās aglutinācijas tests ir ļoti specifisks. Tas ir viegli izpildāms un diezganvizuāli, lai ātri noteiktu antigēnu klātbūtni pacienta asins serumā. To lieto, lai pārbaudītu Vidala reakciju (tīfa un paratīfa drudža diagnozi) un Veiglu (tīfu).
Tā pamatā ir īpaša mijiedarbība starp cilvēka antivielām (vai aglutinīniem) un mikrobu šūnām (aglutenogēniem). Pēc to mijiedarbības veidojas daļiņas, kas izgulsnējas. Tā ir pozitīva zīme. Reakcijas iestatīšanai var izmantot dzīvus vai nogalinātus mikrobu aģentus, sēnītes, vienšūņus, asins šūnas un somatiskās šūnas.
Ķīmiski reakcija ir sadalīta divos posmos:
- Īpaša antivielu (AT) saistība ar antigēniem (AG).
- Nespecifisks - AG-AT konglomerātu izgulsnēšanās, tas ir, aglutināta veidošanās.
Netiešā aglutinācijas reakcija (IPHA)
Šī reakcija ir jutīgāka nekā iepriekšējā. To izmanto, lai diagnosticētu slimības, ko izraisa baktērijas, intracelulāri parazīti un vienšūņi. Tas ir tik specifisks, ka var noteikt pat ļoti zemas antivielu koncentrācijas.
Tā ražošanai tiek izmantoti attīrīti aitas eritrocīti un cilvēka sarkanās asins šūnas, kas iepriekš apstrādātas ar antivielām vai antigēniem (atkarībā no tā, ko laborants vēlas atrast). Dažos gadījumos cilvēka sarkanās asins šūnas tiek ārstētas ar imūnglobulīniem. Tiek uzskatīts, ka eritrocītu seroloģiskās reakcijas ir notikušas, ja tās ir nosēdušās caurules apakšā. Par pozitīvu reakcijuteiksim, kad šūnas ir sakārtotas apgriezta lietussarga veidā, aizņemot visu apakšu. Negatīvu reakciju uzskaita, ja eritrocīti nosēdušies kolonnā vai pogas veidā dibena centrā.
Nokrišņu reakcija (RP)
Šāda veida seroloģiskās reakcijas tiek izmantotas, lai noteiktu ārkārtīgi mazas antigēnu daļiņas. Tie var būt, piemēram, olb altumvielas (vai to daļas), proteīnu savienojumi ar lipīdiem vai ogļhidrātiem, baktēriju daļas, to toksīni.
Serumus reakcijai iegūst, mākslīgi inficējot dzīvniekus, parasti trušus. Ar šo metodi jūs varat iegūt pilnīgi jebkuru nogulsnējošu serumu. Seroloģisko izgulsnēšanās reakciju iestatījums pēc darbības mehānisma ir līdzīgs aglutinācijas reakcijām. Serumā esošās antivielas apvienojas ar antigēniem koloidālā šķīdumā, veidojot lielas proteīna molekulas, kas tiek nogulsnētas uz mēģenes dibena vai uz substrāta (gela). Šī metode tiek uzskatīta par ļoti specifisku, un tā var noteikt pat niecīgus vielas daudzumus.
Izmanto mēra, tularēmijas, Sibīrijas mēra, meningīta un citu slimību diagnosticēšanai. Turklāt viņš ir iesaistīts tiesu medicīnas ekspertīzē.
Gēla izgulsnēšanās reakcija
Seroloģiskās reakcijas var veikt ne tikai šķidrā vidē, bet arī agara gēlā. To sauc par difūzo nokrišņu metodi. Ar tās palīdzību tiek pētīts kompleksu antigēnu maisījumu sastāvs. Šīs metodes pamatā ir antigēnu ķīmotaksi pret antivielām un otrādi. Želejā viņi pārvietojasviens pret otru dažādos ātrumos un, satiekoties, veido nokrišņu līnijas. Katra rinda ir viena AG-AT kopa.
Eksotoksīnu neitralizācijas reakcija ar antitoksīnu (PH)
Antitoksiskie serumi spēj neitralizēt mikroorganismu radītā eksotoksīna darbību. Šīs seroloģiskās reakcijas ir balstītas uz to. Mikrobioloģija izmanto šo metodi, lai titrētu serumus, toksīnus un toksoīdus un noteiktu to terapeitisko aktivitāti. Toksīnu neitralizācijas spēku nosaka parastās mērvienības - AE.
Turklāt, pateicoties šai reakcijai, ir iespējams noteikt eksotoksīna sugu vai veidu. To izmanto stingumkrampju, difterijas, botulisma diagnostikā. Pētījumu var veikt gan “uz stikla”, gan gēlā.
Līzes reakcija (RL)
Imūnserumam, kas nonāk pacienta organismā, papildus galvenajai pasīvās imunitātes funkcijai piemīt arī lizējošas īpašības. Tas spēj izšķīdināt mikrobu aģentus, šūnu svešķermeņus un vīrusus, kas nonāk pacienta ķermenī. Atkarībā no serumā iekļauto antivielu specifikas tiek izdalīti bakteriolizīni, citolizīni, spirohetolizīni, hemolizīni un citi.
Šīs specifiskās antivielas sauc par "komplementu". Tas ir atrodams gandrīz visos cilvēka ķermeņa šķidrumos, tam ir sarežģīta olb altumvielu struktūra un tas ir ārkārtīgi jutīgs pret temperatūras paaugstināšanos, kratīšanu, skābēm un tiešiem saules stariem. Bet žāvētā stāvoklī tas spēj saglabātiestā lizējošās īpašības līdz sešiem mēnešiem.
Ir šāda veida šāda veida seroloģiskās reakcijas:
- bakteriolīze;
- hemolīze.
Bakteriolīze tiek veikta, izmantojot pacienta asins serumu un specifisku imūnserumu ar dzīviem mikrobiem. Ja asinīs ir pietiekami daudz komplementa, pētnieks redzēs, ka baktērijas lizējas, un reakcija tiks uzskatīta par pozitīvu.
Otra asins seroloģiskā reakcija ir tāda, ka pacienta sarkano asins šūnu suspensiju apstrādā ar serumu, kas satur hemolizīnus, kas tiek aktivizēti tikai noteikta komplimenta klātbūtnē. Ja tāds ir, tad laborants novēro sarkano asins šūnu izšķīšanu. Šo reakciju plaši izmanto mūsdienu medicīnā, lai noteiktu komplementa titru (tas ir, tā mazāko daudzumu, kas provocē eritrocītu līzi) asins serumā un veiktu komplementa fiksācijas analīzi. Tādā veidā tiek veikta sifilisa seroloģiskā pārbaude - Vasermana reakcija.
Komplementa fiksācijas reakcija (CFR)
Šo reakciju izmanto, lai pacienta asins serumā noteiktu antivielas pret infekcijas izraisītāju, kā arī identificētu patogēnu pēc tā antigēnās struktūras.
Līdz šim mēs esam aprakstījuši vienkāršas seroloģiskās reakcijas. RSK tiek uzskatīta par sarežģītu reakciju, jo tajā mijiedarbojas nevis divi, bet trīs elementi: antiviela, antigēns un komplements. Tās būtība slēpjas faktā, ka mijiedarbība starp antivielu un antigēnurodas tikai komplementa proteīnu klātbūtnē, kas adsorbējas uz izveidotā AG-AT kompleksa virsmas.
Pašos antigēnos pēc komplementa pievienošanas notiek būtiskas izmaiņas, kas liecina par reakcijas kvalitāti. Tā var būt līze, hemolīze, imobilizācija, baktericīda vai bakteriostatiska iedarbība.
Pati reakcija notiek divās fāzēs:
- Antigēna-antivielu kompleksa veidošanās, kas pārbaudītājam nav vizuāli redzama.
- Antigēna izmaiņas komplementa ietekmē. Šo fāzi visbiežāk var izsekot ar neapbruņotu aci. Ja reakcija nav vizuāli redzama, tad izmaiņu identificēšanai tiek izmantota papildu indikatoru sistēma.
Indikatoru sistēma
Šīs reakcijas pamatā ir komplementa fiksācija. Stundu pēc RSC iestatīšanas mēģenē pievieno attīrītus aunu eritrocītus un hemolītisko serumu bez komplementa. Ja mēģenē paliek nesaistīts komplements, tas pievienosies AG-AT kompleksam, kas veidojas starp aitas asins šūnām un hemolizīnu, un izraisīs to izšķīšanu. Tas nozīmēs, ka RSK ir negatīvs. Ja eritrocīti palika neskarti, tad attiecīgi reakcija ir pozitīva.
Hemaglutinācijas tests (RGA)
Ir divas principiāli atšķirīgas hemaglutinācijas reakcijas. Viens no tiem ir seroloģisks, to izmanto asins grupu noteikšanai. Šajā gadījumā sarkanās asins šūnas mijiedarbojas ar antivielām.
Un otraisreakcija neattiecas uz seroloģisko, jo sarkanās asins šūnas reaģē ar vīrusu ražotiem hemaglutinīniem. Tā kā katrs patogēns iedarbojas tikai uz specifiskiem eritrocītiem (vistas, jēra, pērtiķa), šo reakciju var uzskatīt par ļoti specifisku.
Jūs varat noteikt, vai reakcija ir pozitīva vai negatīva, pēc asins šūnu atrašanās vietas mēģenes apakšā. Ja to raksts atgādina apgrieztu lietussargu, tad vēlamais vīruss atrodas pacienta asinīs. Un, ja visi eritrocīti ir izveidojušies kā monētu kolonna, tad nav vēlamo patogēnu.
Hemaglutinācijas inhibīcijas tests (HITA)
Šī ir ļoti specifiska reakcija, kas ļauj noteikt vīrusu veidu, veidu vai specifisku antivielu klātbūtni pacienta asins serumā.
Tās būtība slēpjas faktā, ka mēģenē kopā ar testa materiālu pievienotās antivielas novērš antigēnu nogulsnēšanos uz eritrocītiem, tādējādi apturot hemaglutināciju. Tā ir kvalitatīva pazīme, ka asinīs ir specifiski antigēni konkrētajam vīrusam, kas tiek meklēts.
Imunofluorescences reakcija (RIF)
Reakcija balstās uz spēju noteikt AG-AT kompleksus ar fluorescējošu mikroskopiju pēc to apstrādes ar fluorohroma krāsvielām. Šī metode ir viegli apstrādājama, tai nav nepieciešama tīrkultūras izolācija un tā aizņem maz laika. Tas ir nepieciešams, lai ātri diagnosticētu infekcijas slimības.
Praksē šīs seroloģiskās reakcijas iedala divos veidos: tiešās un netiešās.
Tiešais RIF tiek ražots noantigēns, kas ir iepriekš apstrādāts ar fluorescējošu serumu. Un netiešais ir tas, ka vispirms zāles apstrādā ar parasto diagnostisko līdzekli, kas satur interesējošo antivielu antigēnus, un pēc tam tiek atkārtoti uzklāts luminiscējošais serums, kas ir specifisks AG-AT kompleksa proteīniem, un mikrobu šūnas. kļūst redzami mikroskopijā.
