Pēdējā laikā ir izstrādāta uzticama, ļoti jutīga un ātra metode dažādu cilvēku infekcijas slimību diagnosticēšanai. Šo metodi sauc par "PCR analīzi". Kas tas ir, kāda ir tā būtība, kādus mikroorganismus tas var atklāt un kā to pareizi uzņemt, pastāstīsim mūsu rakstā.
Atklājumu vēsture
Pimerāzes ķēdes reakcijas (PCR) metodi izgudroja amerikāņu zinātnieks Karijs Mulliss 1983. gadā. Sākotnēji diagnostikas metodi patentēja korporācija Cetus, kurā strādāja tās radītājs. Bet 1992. gadā visas tiesības un patenti tika pārdoti Hoffman-La Roche. Pēc tam izrādījās, ka līdzīgi pētījumi veikti paralēli un tos pierakstījuši arī citi amerikāņu biologi, piemēram, Alise Čena, Deivids Edgars, Džons Trels. 1980. gadā ar šo problēmu nodarbojās arī padomju zinātnieki A. Sļusarenko, A. Kaledins un S. Gorodetskis. Tāpēc nebija iespējams noteikt vienīgo autortiesību turētāju. Daudzi ievērojami bioķīmiķi ir devuši zināmu ieguldījumu polimerāzes ķēdes reakcijas tehnikas attīstībā un patentējuši savus jauninājumus. Šobrīd analīzePCR tiek veikta visur speciāli aprīkotās laboratorijās.
PCR diagnostikas metodes būtība
PCR analīze: kas tā ir un kā tā darbojas? Metodes būtība ir palielināt noteiktas mikrobu vides tilpumu mākslīgos apstākļos, izmantojot īpašu DNS polimerāzes enzīmu. Šim nolūkam esošais DNS materiāls tiek daudzkārt pavairots. Tādējādi, klātesot paraugā patogēnam mikroorganismam, tā daudzums bioķīmisko laboratorisko manipulāciju rezultātā tiks palielināts, un mikroskopā noteikt baktēriju nebūs grūti.
Kā notiek materiālu izpēte?
Nepieciešams analīzei:
- DNS matrica;
- grunts, kas savieno materiāla gabala galus;
- karstumizturīgs DNS polimerāzes enzīms;
- ķimikālijas, kas liek fermentiem darboties pareizi;
- buferšķīdums, kas nepieciešams, lai radītu atbilstošus apstākļus DNS materiāla augšanai un attīstībai.
Lai veiktu PCR, tiek veikti 25-30 atkārtojumi, kas sastāv no trim posmiem: denaturācijas, atkvēlināšanas un pagarināšanas.
Polimēra ķēdes reakcijas analīzei tiek izmantota īpaša ierīce - pastiprinātājs. Mūsdienu aprīkojums ļauj iestatīt nepieciešamo programmu apkures un dzesēšanas caurulēm, lai novērstu kļūdas diagnostikas laikā.
Kur tiek izmantota diagnostika?
Polimēru ķēdes reakcijas metodi izmanto dažādās medicīnas jomās:
- kriminālisti artas identificē ģenētisko materiālu, piemēram, matus, siekalas vai asinis;
- PCR asins analīze palīdz genotipa noteikšanā, piemēram, lai noteiktu individuālu ģenētiski raksturīgu reakciju uz noteiktām zālēm;
- izmantojot šo metodi, lai izveidotu ģimenes saites starp cilvēkiem;
- Par populārāko PCR metodi kļuvusi medicīniskajā diagnostikā dažādu infekcijas slimību noteikšanai.
Kādas infekcijas atklāj PCR?
Tātad, medicīna jau sen un veiksmīgi izmanto PCR analīzi. Kas tas ir, mēs jau zinām. Un kādus patogēnus ar to var atklāt? Ar PCR metodi tiek diagnosticētas šādas infekcijas slimības:
- hepatīts A, B, C;
- ureaplazmoze;
- kandidoze;
- hlamīdijas;
- mikoplazmoze;
- gardnereloze;
- infekciozā mononukleoze;
- trichomoniāze;
- papilomas vīrusa infekcija;
- tuberkuloze;
- herpes infekcijas veids 1 un 2;
- helikobakterioze;
- citomegalovīruss;
- difterija;
- salmoneloze;
- HIV infekcija.
Arī PCR metodes tiek izmantotas vēža diagnostikā.
Metodes priekšrocības
PCR diagnostikai ir vairākas priekšrocības:
- Augsta jutība. Pat tad, ja ir tikai dažas mikroorganismu DNS molekulas, PCR analīze nosaka infekcijas klātbūtni. Metode palīdzēs hronisku un latentu slimību gadījumā. Bieži šādos gadījumos mikroorganismscitādi nav kultivēts.
- Pētīšanai ir piemērots jebkurš materiāls, piemēram, siekalas, asinis, dzimumorgānu izdalījumi, mati, epitēlija šūnas. Visizplatītākā ir asins un uroģenitālās uztriepes analīze PCR.
- Nav nepieciešama ilgtermiņa raža. Automatizētais diagnostikas process ļauj iegūt pētījuma rezultātus pēc 4-5 stundām.
- Metode ir gandrīz 100% uzticama. Ir reģistrēti tikai atsevišķi kļūdaini negatīvu rezultātu gadījumi.
- Spēja identificēt vairākus patogēnu veidus no viena materiāla parauga. Tas ne tikai paātrina slimības diagnosticēšanas procesu, bet arī ievērojami samazina materiālās izmaksas. Bieži vien ārsts izraksta visaptverošu PCR analīzi. Izmeklējuma cena, kas sastāv no sešu patogēnu noteikšanas, ir aptuveni 1500 rubļu.
Ieteikumi, lai sagatavotos analīzei
Lai rezultāti PCR pētījuma laikā būtu ticami, jāveic tests, ievērojot ieteikumus iepriekšējai sagatavošanai diagnozei:
- Pirms siekalu ziedošanas jums vajadzētu atturēties no ēšanas un medikamentu lietošanas 4 stundas pirms paraugu ņemšanas. Tieši pirms procedūras izskalojiet muti ar vārītu ūdeni.
- Iepriekš minētie noteikumi jāievēro arī, ņemot paraugu no vaiga iekšējās virsmas. Pēc skalošanas ieteicams veikt vieglu ādas masāžu, lai izceltu dziedzera sekrēciju.
- Urīnu parasti savāc mājās. Lai to izdarītu, jums ir jāveic rūpīga tualetedzimumorgāni. Savākt 50-60 ml urīna sterilā plastmasas traukā. Lai nodrošinātu materiāla tīrību, sievietēm ieteicams makstī ievietot tamponu, bet vīriešiem pēc iespējas vairāk atvilkt ādas kroku. Neziedo mēnešreižu laikā.
- Lai ziedotu spermu, jums ir jāatturas no dzimumakta 3 dienas pirms paraugu ņemšanas. Tāpat mediķi neiesaka apmeklēt pirti un neiet karstā vannā, nelietot alkoholu un asus ēdienus. Jums ir jāatturas no urinēšanas 3 stundas pirms testa.
- Lai ņemtu uroģenitālo uztriepi, piemēram, ja tiek veikts PCR tests uz hlamīdiju, gan sievietēm, gan vīriešiem ieteicams 3 dienas seksuāli atpūsties. 2 nedēļas pirms analīzes nedrīkst lietot antibakteriālas zāles. Nedēļu jums jāpārtrauc intīmo želeju, ziežu, maksts svecīšu, douching lietošana. 3 stundas pirms pārbaudes jums jāatturas no urinēšanas. Menstruāciju laikā paraugu ņemšana netiek veikta, tikai 3 dienas pēc asinsizplūduma pārtraukšanas var paņemt uroģenitālo uztriepi.
PCR grūtniecības laikā
Bērna gaidību periodā daudzas seksuāli transmisīvās infekcijas ir ārkārtīgi bīstamas normālai augļa attīstībai. STS var provocēt intrauterīnās augšanas aizkavēšanos, spontāno abortu vai priekšlaicīgas dzemdības, iedzimtas bērna anomālijas. Tāpēc grūtniecības sākumā ir ārkārtīgi svarīgi veikt PCR pārbaudi. Reģistrējoties nepieciešams nokārtot analīzi - līdz 12 nedēļām.
Materiāls tiek ņemts no dzemdes kakla kanāla, izmantojot īpašu suku. Procedūra ir nesāpīga un nerada briesmas mazulim. Parasti grūtniecības laikā tiek veikta hlamīdiju analīze ar PCR metodi, kā arī ureaplazmoze, mikoplazmoze, citomegalovīruss, herpes, papilomas vīruss. Šādu izmeklējumu kompleksu sauc par PCR-6.
PCR HIV diagnostikai
Sakarā ar to, ka polimerāzes ķēdes reakcijas metode ir ļoti jutīga pret izmaiņām organismā un diagnozes apstākļiem, rezultātu var ietekmēt daudzi faktori. Tāpēc PCR analīze HIV infekcijas noteikšanai nav uzticama metode, tās efektivitāte ir 96–98%. Pārējos 2-4% gadījumu tests dod viltus pozitīvus rezultātus.
Bet dažās situācijās HIV PCR diagnostika ir neaizstājama. To parasti ievada cilvēkiem ar viltus negatīvu ELISA rezultātu. Šādi rādītāji liecina, ka cilvēkam vēl nav izveidojušās vīrusa antivielas un tās nav iespējams noteikt bez vairākkārtēja skaita pieauguma. Tieši to var panākt, veicot PCR asins analīzi.
Šīs diagnostikas ir nepieciešamas arī pirmā dzīves gada bērniem, kas dzimuši no HIV pozitīvas mātes. Šī metode ir vienīgais veids, kā droši noteikt bērna statusu.
PCR hepatīta diagnosticēšanai
Polimerāzes ķēdes reakcijas metode ļauj noteikt A, B, C hepatīta vīrusa DNS jau ilgi pirms antivielu veidošanās pret infekciju vai slimības simptomu parādīšanās. C hepatīta PCR analīze ir īpaši efektīva, jo 85% gadījumu šī slimība ir asimptomātiska un bezsavlaicīga ārstēšana nonāk hroniskā stadijā.
Savlaicīga patogēna noteikšana palīdzēs izvairīties no komplikācijām un ilgstošas ārstēšanas.
Visaptveroša PCR pārbaude
Kompleksā PCR analīze: kas tas ir? Šis ir izmeklējums, izmantojot polimēru ķēdes reakcijas metodi, kas ietver vairāku veidu infekciju noteikšanu vienlaikus: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, citomegalovīruss, ureaplasma urealiticum, 1. un 2. tipa herpes, gonoreja, papilomas vīruss. Šādas diagnostikas cena svārstās no 2000 līdz 3500 rubļiem. atkarībā no klīnikas, izmantotajiem materiāliem un aprīkojuma, kā arī no analīzes veida: kvalitatīvā vai kvantitatīvā. Kas ir nepieciešams jūsu gadījumā - ārsts izlems. Dažos gadījumos pietiek tikai ar patogēna klātbūtnes noteikšanu, citos, piemēram, ar HIV infekciju, svarīga loma ir kvantitatīvajam titram. Diagnosticējot visus iepriekš minētos patogēnus, izmeklējumu sauc par "PCR-12 analīzi".
Analīzes rezultātu atšifrējums
PCR analīzes atšifrēšana nav sarežģīta. Ir tikai 2 rādītāja skalas - "pozitīvs rezultāts" un "negatīvs rezultāts". Atklājot patogēnu, ārsti ar 99% pārliecību var apstiprināt slimības klātbūtni un sākt pacienta ārstēšanu. Izmantojot kvantitatīvu infekcijas noteikšanas metodi, attiecīgajā kolonnā tiks norādīts konstatēto baktēriju skaitliskais rādītājs. Tikai ārsts var noteikt slimības apmēru un nozīmēt nepieciešamo ārstēšanu.
Atsevišķos gadījumos, piemēram, nosakot HIV infekciju ar PCR, ar negatīvu rezultātu rodas nepieciešamība veikt papildu izmeklējumus, lai apstiprinātu iegūtos rādītājus.
Kur veikt pārbaudi?
Kur veikt PCR testu: valsts klīnikā vai privātā laboratorijā? Diemžēl pašvaldību ārstniecības iestādēs aprīkojums un metodes bieži ir novecojušas. Tāpēc labāk ir dot priekšroku privātām laboratorijām ar modernu aprīkojumu un augsti kvalificētu personālu. Turklāt privātā klīnikā rezultātus iegūsi daudz ātrāk.
Maskavā daudzas privātas laboratorijas piedāvā PCR analīzi dažādām infekcijām. Piemēram, tādās klīnikās kā Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro, tiek veikta PCR analīze. Pārbaudes cena ir no 200 rubļiem. viena patogēna identificēšanai.
Var secināt, ka infekcijas slimību diagnostika ar PCR vairumā gadījumu ir ātrs un uzticams veids, kā noteikt patogēnu organismā agrīnās infekcijas stadijās. Bet tomēr noteiktos gadījumos ir vērts izvēlēties citas diagnostikas metodes. Tikai speciālists var noteikt šāda pētījuma nepieciešamību. PCR analīzes atšifrēšanai nepieciešama arī profesionāla pieeja. Ievērojiet ārsta ieteikumus un neveiciet testus, kas jums nav nepieciešami.
