Saskaņā ar PVO statistiku pēdējo 40 gadu laikā no AIDS miruši 25 miljoni cilvēku. Šīs infekcijas radītais kaitējums ir milzīgs. Lielākā daļa inficēto izrādījās Āfrikā, no kurienes šī infekcija nākusi. Ar HIV slimības diagnostika kļūst īpaši aktuāla. Tiesa, HIV vēl nav izārstēt, taču savlaicīga ārstēšana var paildzināt pacienta dzīvi un uzlabot tā kvalitāti.
HIV infekcijas diagnostika
HIV infekciju dažādos posmos nosaka ar šādām metodēm:
- ELISA - enzīmu imūntests.
- Western blot.
- PCR - polimerāzes ķēdes reakcija.
- Ātrās pārbaudes.
PCR metodi izstrādāja amerikāņu bioķīmiķis Karijs Mulliss, kurš par to saņēma Nobela prēmiju 1983. gadā. Mūsdienās šī metode medicīnā visu infekciju diagnostikā tiek uzskatīta par vadošo tās precizitātes un informācijas satura dēļ. HIV šajā ziņā nav izņēmums.
Analīzes būtība
Jebkura dzīva šūna satur RNS un DNS. Šīs nukleīnskābes spēj paškopēt un pašreplicēties. Katrai infekcijai DNS fragmenti ir unikāli. ATbioloģiskajos šķidrumos šie nukleīnskābju fragmenti cirkulē. Tos notver un atpazīst speciāla iekārta – reaktors. Tas ir metodes pamatā. Laborants šos fragmentus saskaita. Retrovīrusu HIV kontrolē RNS. Pat ar atsevišķām vīrusu daļiņu kopijām PCR var tās noteikt un saskaitīt.
Kā testa šķidrumu visbiežāk izmanto venozās asinis. Metodes īpašās sastāvdaļas saistās ar vīrusa daļiņām un padara tās nosakāmas, jo atrastie fragmenti tiek reizināti.
HIV gadījumā vīrusa klātbūtnes rezultātu var iegūt ilgi pirms klīnikas parādīšanās. Tāpēc, pateicoties tā augstajai jutībai, PCR ir tik augsta diagnostiskā vērtība. Milzīgs PCR plus ir metodes daudzpusība. Infekcijas inkubācijas periods PCR nav šķērslis.
Izpētes izmaksas
PCR metode ir diezgan dārga. Tas ir viens no tā lielākajiem trūkumiem. Tam nepieciešams jaunākais aprīkojums un augsti kvalificēts laborants. Ņemot vērā iepriekš minēto, mazās apdzīvotās vietās PCR diagnostika netiek veikta. Jūs varat pārbaudīties tikai specializētās lielajās klīnikās.
HIV DNS testēšanas izmaksas Maskavas klīnikās ir sākot no 2800 rubļiem, vīrusu slodze (vīrusa RNS plazmā) noteikta ar PCR – no 8800 rubļiem, bet HIV rezistence pret proteāzes inhibitoriem – no 16 500 rubļiem. Kā redzat, cenas ir diezgan augstas. Saskaņā ar MHI politiku PCR var veikt bez maksas valsts klīnikās. Svarīgs,ka procedūru var veikt anonīmi. Reģistrā pacients saņem numuru, pēc kura viņš var uzzināt rezultātu. Mūsdienu medicīnas centros ir klientu personīgie konti, kuros tiks ievadīti šie dati.
Pētniecības mērķi
PCR diagnostika HIV noteikšanai tiek nozīmēta šādos gadījumos:
- Infekcijas noteikšana bērnam, kas dzimis slimai mātei vai nēsātājai, lai noteiktu intrauterīnu infekciju.
- Ja ELISA rezultāti sniedza apšaubāmus rezultātus (šajā gadījumā HIV PCR palīdz noteikt galīgo diagnozi).
- Lai noteiktu vīrusa kvantitatīvo saturu organismā.
- Ar pozitīvu imūnblotu tie viens otru papildina ar PCR.
- Pārbauda donorus.
- HIV agrīnai diagnostikai.
- Lai noteiktu efektivitāti un izturību pret ART.
Šīs analīzes priekšrocība ir tāda, ka HIV PCR var veikt pat bērniem, kas jaunāki par vienu gadu.
Pētījumi bieži tiek veikti nevis primārai diagnostikai, bet jau ārstēšanas procesā. Primārā diagnostika ir seroloģiskie pētījumi (tie nosaka antivielu līmeni pret HIV). Ja kļūdaini pozitīvs rezultāts tiek atkārtots, tas var būt ar zemu vīrusu slodzi.
PCR diagnosticē HIV, ja vēl nav antivielu pret to. ELISA metode šajā gadījumā nesniegs atbildi.
Un PCR uz HIV jau būs pozitīvs. Bet šī HIV perioda simptomi ir nespecifiski. Vispirms pacients ilgstoši un neveiksmīgi ārstē ARVI pie ģimenes ārsta. Jāpatur prātā, ka HIV diagnoze balstās tikai uzPCR nav likts, ir nepieciešams nokārtot citus visaptverošus testus. PCR metode biežāk ir palīglīdzeklis sarežģītos gadījumos.
Gatavošanās analīzei
Pirms PCR HIV noteikšanai 2 dienas pirms testa nedrīkst ēst treknu pārtiku, alkoholu. Tāpat labāk nenoslogoties garīgi un fiziski. Ja pacientam tiek nozīmēts imūnstimulācijas kurss, tas tiek pārtraukts 2 nedēļas pirms analīzes.
Asinis vislabāk ņemt no rīta. Var izmeklēt arī citus ķermeņa bioloģiskos šķidrumus (spermu, maksts sekrēciju), bet asinis ir labākais materiāls. Siekalas, sviedri, urīns un asaras netiek izmantotas, jo vīrusa saturs tajos ir minimāls.
PCR plusi HIV ārstēšanai
Metodes priekšrocības ir ārkārtīgi zemā viltus pozitīva rezultāta iespējamība, reakcijas universālums jebkuriem ķermeņa bioloģiskajiem šķidrumiem. Analīzei ir plašs diapazons:
- Vienu asins noņemšanu var izmantot dažādu infekciju noteikšanai.
- Tehnika steidzama, rezultāts gatavs jau nākamajā dienā.
- Pārliecība ir no 85 līdz 98%.
- HIV klātbūtni var noteikt 10-14 dienas pēc inficēšanās (šobrīd vēl nav antivielu).
- Bez vecuma ierobežojuma, var veikt uzreiz no dzimšanas.
Metodes mīnusi
PCR trūkumi ir šādi:
- Analīzes izmaksas.
- Nepieciešams sarežģīts medicīnas aprīkojums.
- Nepieciešams augsti kvalificēts laborants un ārsts,ņēmēja analīze.
- Reakcija ir ļoti jutīga, tāpēc kļūda var būt 20%.
- Var radīt kļūdaini pozitīvu rezultātu, ja pacientam ir autoimūni procesi, onkoloģija, hroniskas infekcijas.
- Laboratorijas telpās nepieciešama īpaša tīrība, jo vīruss analīzēs var nokļūt no gaisa. Tad rezultāts būs nepareizs.
Laboratorijām, kas veic PCR, lai uzlabotu diagnostikas kvalitāti, saskaņā ar SanPiN sistēmu ir izstrādāti īpaši stingri iekšējās kontroles pasākumi. Turklāt ir jāievēro visi darba noteikumi ar šo tehniku:
- Stingri jāievēro informācija uz mēģenēm.
- Pirms asins paraugu ņemšanas pārbaudiet vēlreiz un pārliecinieties, ka analīze ir ieplānota.
- Māsai pareizi jāmarķē caurules.
- Laborantam pareizi jāveic visas manipulācijas ar biomateriālu, lai novērstu savstarpēju inficēšanos.
- Pārbaudes sistēmai jābūt izcilas kvalitātes.
Tikai tad, ja ir izpildīti visi šie nosacījumi, kļūda atbildē var būt tikai aptuveni 2% sēriju.
Analīzes ilgums
Daudzus interesē, cik ilgi būs gatava HIV PCR. Diagnoze ilgst ne vairāk kā 8 stundas. Pacients atbildi var saņemt jau nākamajā dienā. Ātrā pārbaude tiek veikta 2 stundu laikā.
PCR uzticamība
Neskatoties uz daudzajām priekšrocībām, PCR netiek uzskatīta par ideālu diagnostikas metodi. Ar viņu sazinās gadījumānepieciešamība iegūt skrīninga testus HIV klātbūtnei organismā.
Kad tiek ņemtas asinis analīzei?
Cik ilgi jālieto PCR HIV noteikšanai? Uzticamu rezultātu var iegūt jau veicot asiņu ņemšanu 4-4 dienas pēc iespējamās infekcijas. Pēc 2 nedēļām HIV ticamība būs 98%, bet ar 5 dienu periodu - 80%. Negatīvā HIV PCR rezultāta klātbūtne būs ticama, taču, lai rezultāts būtu absolūti precīzs, tiek veikta arī ELISA.
ELISA analīze būs efektīva tikai tad, ja būs antivielas pret vīrusu, šis laiks var ilgt no 1-3 mēnešiem līdz sešiem mēnešiem. Tā kā ELISA dod lielāku varbūtību (98% -99,9%), PCR nevar saukt par 100% apstiprinošu testu HIV infekcijas klātbūtnei. Bet, no otras puses, šī ir vienīgā tehnika, kurā nav jāgaida, līdz parādīsies antivielas.
Ar HIV PCR var sniegt informāciju par ART efektivitāti, HIV slimības stadiju un VN skaitu (kvantitatīvs HIV klātbūtnes novērtējums organismā). Tas atspoguļos izmaiņu nopietnību un apjomu.
PCR pārbaude uz HIV ir nepieciešama arī tad, ja asinīs ir antivielas, bet to klātbūtne neliecina par HIV infekcijas ticamību klīniski.
Tie tiek pārbaudīti ne tikai attiecībā uz infekciju un gadījuma dzimumaktu. Citi gadījumi:
- Grūtniecības plānošana.
- Gaidāmā operācija.
- Ikdienas sekss.
- Dažām profesijām šī pārbaude ir nepieciešama, lai varētu strādāt (skolotāji, ārsti un citi medicīnas darbinieki).
- Ieslodzītie.
- TB pacienti.
- Ārkārtas situāciju ministrijas un policijas darbinieki.
- Atgriezies no atvaļinājuma no eksotiskām valstīm (ja vēlies pārliecināties, ka nav infekcijas).
- Prostitūtas.
- Ārzemju studenti.
- Narkotikas.
Arī daži pacienta simptomi var likt veikt HIV testu:
- Pēkšņs svara zudums.
- Caureja, kas ilgst vairāk nekā 3 nedēļas
- Nepamatoti augsta temperatūra ilgu laiku.
- Pietūkuši limfmezgli.
- Neizskaidrojams pneimonijas, kandidozes uc cēlonis
Analīzes atšifrēšana ir ārstējošā ārsta, nevis laboranta prerogatīva.
PCR vai ELISA, kas ir labāks?
Kad HIV vīrusa RNS PCR diagnoze tiek noteikta gan kvalitatīvi, gan kvantitatīvi. Šī analīze skaidri identificē konkrētu patogēnu pat tad, ja ir vairāki savstarpēji reaģējoši patogēni. Bioloģisko materiālu var izmantot pat žāvētā veidā. Negatīvā puse ir PCR augstā jutība, kad viltus pozitīvu rezultātu var iegūt pat neliela daudzuma svešas DNS klātbūtne uz instrumentiem vai mēģenē.
ELISA uzdevums un iespēja ir noteikt retrovīrusa antivielu klātbūtni. Lai gan tā precizitāte ir 99%, tas nav piemērojams sākumposmā.
Kvalitatīva HIV pārbaude
Augstas kvalitātes PCR HIV noteikšanai nosaka vīrusa klātbūtni organismā. Rezultāti šajā gadījumā izskatīsies šādi: pozitīvi, viltus pozitīvi, negatīvi. Bet šis pētījums nesniegs informāciju par retrovīrusa daudzumu. Tāda kvalitatīva analīzenav piemēroti, ja HIV infekcija organismā jau ir konstatēta ar citiem līdzekļiem.
Ar augstas kvalitātes PCR nav iespējams kontrolēt ārstēšanas efektivitāti.
HIV kvantitatīva noteikšana
Izpilda tikai ar HIV inficēti cilvēki, lai saskaitītu vīrusa RNS kopiju skaitu bioloģiskā produktā.
Šāda pētījuma mērķis ir uzraudzīt notiekošo ārstēšanu un noteikt vīrusa rezistenci pret to. Pretvīrusu terapiju šādos aprēķinos ārsts akli nenosaka, tāpēc tā būs efektīvāka. Kvantitatīvā PCR HIV infekcijai tiek veikta daudz biežāk. Šī analīze tiek parādīta kā asiņu kopija/ml.
Kādus rezultātus var sniegt:
- Vīrusa RNS nav vai tā ir ļoti maza (apmēram 20 kopijas/ml). Nav skaidrības par diagnozi.
- No 20 - 10 līdz 6. pakāpes kopijām / ml - diagnoze ir uzticama.
- Vairāk nekā 106 kopijas/ml - augsts VN.
Laboratorijas var veikt HIV reāllaika PCR testus. Tas nozīmē PCR produktu uzkrāšanās novērošanu un skaitlisku novērtēšanu ar automātisku rezultātu reģistrēšanu.
